Kit Pengesanan Asid Nukleik Coronavirus(SARS-Cov-2) Baharu
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Flubijihscent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】Kit Pengesanan Asid Nukleik Coronavirus(SARS-Cov-2) Baharu (Kaedah Siasatan RT-PCR Fluorescent)
【Packaging specifications 】25 Ujian/Kit
【Intended usumur】
Kit ini digunakan untuk pengesanan kualitatif asid nukleik daripada coronavirus baharu dalam swab nasofaring, swab orofarinks (tenggorokan), swab hidung anterior, swab mid-turbinate, cucian hidung dan aspirasi hidung daripada individu yang disyaki COVID19 oleh pembekal penjagaan kesihatan mereka. Pengesanan gen ORF1ab dan N bagi coronavirus baharu boleh digunakan untuk diagnosis tambahan dan pemantauan epidemiologi jangkitan coronavirus baharu.
【Principles of the procedure 】
Kit ini direka untuk probe TaqMan khusus dan primer khusus yang direka untuk urutan gen ORF1ab dan N coronavirus novel (SARS-Cov-2). Penyelesaian tindak balas PCR mengandungi 3 set primer khusus dan probe pendarfluor untuk pengesanan sasaran khusus, dan set tambahan primer khusus dan probe pendarfluor digunakan sebagai kawalan standard dalaman kit untuk mengesan gen pengemasan endogen.
Prinsip ujian adalah bahawa probe pendarfluor khusus dicerna dan didegradasi oleh aktiviti exonuclease enzim Taq dalam tindak balas PCR, supaya kumpulan pendarfluor wartawan dan kumpulan pendarfluor yang dipadamkan dipisahkan, supaya sistem pemantauan pendarfluor boleh menerima pendarfluor. isyarat, dan kemudian Melalui kesan pengayaan penguatan PCR, isyarat pendarfluor probe mencapai nilai ambang yang ditetapkan-Nilai Ct (Ambang kitaran). Dalam kes tiada amplikon sasaran, kumpulan pelapor siasatan adalah berhampiran dengan kumpulan pelindapkejutan. Pada masa ini, pemindahan tenaga resonans pendarfluor berlaku, dan pendarfluor kumpulan wartawan dipadamkan oleh kumpulan pelindapkejutan, supaya isyarat pendarfluor tidak dapat dikesan oleh instrumen PCR pendarfluor.
Untuk memantau penggunaan reagen semasa ujian, kit dilengkapi dengan kawalan positif dan negatif: kawalan positif mengandungi plasmid rekombinan tapak sasaran, dan kawalan negatif ialah Air suling, yang digunakan untuk memantau pencemaran alam sekitar. Adalah disyorkan untuk menetapkan kawalan positif dan kawalan negatif secara serentak semasa ujian.
【Main components 】
| Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Components | |
| Name | Spesifikasiifikasi | Kuantitiity | Kuantitiity | |
| Kawalan positif | 180 μL/botol | 1 | 1 | Plasmid binaan buatan, Air suling |
| Kawalan negatif | 180 μL/botol | 1 | 1 | Air suling |
| Campuran SARS-Cov-2 | 358.5 μL/botol | 1 | / | Pasangan primer khusus, probe pendarfluor pengesanan khusus, dNTP, , MgCl2, KCl, Tris-Hcl, Air suling, dsb. |
| Campuran Enzim | 16.5 μL/botol | 1 | / | Enzim Taq, transkripase terbalik, enzim UNG, dll. |
| Campuran SARS-Cov-2(Liofilis) | 25 ujian/vial | / | 1 | Pasangan primer khusus, probe pendarfluor pengesanan khusus, dNTP, enzim Taq, transkripase terbalik, Air suling, dsb. |
| 2x Penampan | 375 μL/botol | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, Air suling, dsb. |
Nota：( 1) Komponen dalam kit kelompok yang berbeza tidak boleh dicampur atau ditukar ganti.
(2) Sediakan reagen anda sendiri: Kit pengekstrakan asid nukleik.
【Storage conditions dan expiration date 】
For BST-SARS-25:Angkut dan simpan pada -20±5℃ untuk masa yang lama.
For BST-SARS-DR-25:Pengangkutan pada suhu bilik. Simpan pada -20±5℃ untuk masa yang lama.
Elakkan kitaran beku-cair berulang. Tempoh sah ditetapkan secara tentatif selama 12 bulan.
Lihat label untuk tarikh pembuatan dan penggunaan.
Selepas pembukaan pertama, reagen boleh disimpan pada -20±5 ° C selama tidak lebih daripada 1 bulan atau sehingga akhir tempoh reagen, mana-mana tarikh yang lebih awal, untuk mengelakkan kitaran beku-cairan berulang, dan bilangan reagen membeku -kitaran pencairan tidak boleh melebihi 6 kali.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1. Jenis sampel yang berkenaan: Larutan asid nukleik yang diekstrak.
2. Penyimpanan dan pengangkutan sampel: Simpan pada-20±5℃ selama 6 bulan.Bekukan dan cairkan sampel tidak lebih daripada 6 kali.
【Tanggaraning method】
1.Nucleic acid extraction
Pilih kit pengekstrakan asid nukleik yang sesuai untuk mengekstrak asid nukleik virus, dan ikut arahan kit yang sepadan. Adalah disyorkan untuk menggunakan kit pengekstrakan dan penulenan asid nukleik yang dikeluarkan oleh Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. atau kit penulenan asid nukleik yang setara.
2. Reaction reagent preparation
2.1 For BST-SARS-25:
( 1) Keluarkan Campuran SARS-Cov-2 dan Campuran Enzim , cair sepenuhnya pada suhu bilik campurkan dengan teliti oleh peranti Vortex dan kemudian sentrifuge sebentar.
(2) Campuran Enzim 16.5uL telah ditambah kepada 358.5uL Campuran SARS-Cov-2 dan dicampur dengan teliti untuk mendapatkan larutan tindak balas campuran.
(3) Sediakan tiub oktal PCR 0.2 mL bersih dan tandakannya dengan 15uL larutan tindak balas campuran di atas setiap telaga.
(4) Tambah 15 μL larutan asid nukleik yang telah dimurnikan, kawalan positif dan kawalan negatif, dan tutup penutup tiub oktal dengan teliti.
(5) Gaul rata dengan menyongsangkan secara terbalik, dan sentrifuge dengan cepat untuk memekatkan cecair di bahagian bawah tiub.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
( 1) Tambah Penampan 375ul 2x ke Campuran SARS-Cov-2((Liofil) untuk menyediakan campuran tindak balas. Gaul sebati dengan mepipet dan kemudian sentrifuge sebentar. （Setelah campuran tindak balas disediakan, disyorkan untuk disimpan pada -20℃ pada penyimpanan jangka panjang.）
(2) Sediakan tiub oktal PCR 0.2 mL bersih dan tandakannya dengan 15μL campuran tindak balas setiap telaga.
(3) Tambah 15μL larutan asid nukleik yang telah dimurnikan, kawalan positif dan kawalan negatif, dan tutup penutup tiub oktal dengan teliti.
(4) Gaul rata dengan menyongsangkan terbalik, dan sentrifuge dengan cepat untuk menumpukan cecair di bahagian bawah tiub.
3. PCR amplification （Sila rujuk manual instrumen untuk tetapan operasi.）
3. 1 Letakkan PCR 8-tiub ke dalam ruang sampel instrumen PCR pendarfluor, dan tetapkan sampel untuk diuji, kawalan positif dan kawalan negatif mengikut susunan pemuatan.
3.2 Saluran pengesanan pendarfluor:
( 1) Gen ORF1ab memilih saluran pengesanan FAM (Pemberita: FAM, Quencher: Tiada).
(2) Gen N memilih saluran pengesanan VIC (Pemberita: VIC, Quencher: Tiada).
(3) Gen standard dalaman memilih saluran pengesanan CY5 (Pemberita: CY5, Quencher: Tiada).
(4) Rujukan Pasif ditetapkan kepada ROX.
3.3 Tetapan parameter program PCR:
| Langkah | Suhu(℃) | Masa | Bilangan kitaran | |
| 1 | Tindak balas transkripsi terbalik | 50 | 15 min | 1 |
| 2 | Pengaktifan enzim Taq | 95 | 2.5 min | 1 |
| 3 | Pengaktifan enzim Taq | 93 | 10 s | 43 |
| Sambungan penyepuhlindapan dan pemerolehan pendarfluor | 55 | 30 s | ||
Selepas menetapkan, simpan fail dan jalankan program tindak balas.
4.Results analysis
Selepas program tamat, keputusan disimpan secara automatik, dan lengkung amplifikasi dianalisis. Lengkung amplifikasi ditetapkan kepada ambang lalai instrumen.
【Explanation of test results 】
1. Tentukan kesahihan percubaan: FAM kawalan positif, saluran VIC harus mempunyai lengkung amplifikasi biasa, dan nilai Ct biasanya kurang daripada 34, tetapi mungkin turun naik disebabkan tetapan ambang berbeza bagi instrumen yang berbeza. Kawalan negatif saluran FAM, VIC hendaklah tidak dikuatkan Ct. Adalah dipersetujui bahawa keperluan di atas mesti dipenuhi pada masa yang sama, jika tidak, ujian ini tidak sah.
2. Keputusan penghakiman
| Saluran FAM/VIC | Keputusan penghakiman |
| Ct＜37 | Ujian sampel adalah positif |
| 37≤Ct＜40 | Lengkung amplifikasi berbentuk S, dan sampel yang mencurigakan perlu diperiksa semula; jika keputusan peperiksaan semula konsisten, ia dinilai sebagai positif, jika tidak negatif |
| Ct≥40 Atau Tiada Penguatan | Ujian sampel adalah negatif (atau di bawah had bawah pengesanan kit) |
Nota: ( 1) Jika kedua-dua saluran FAM dan saluran VIC positif pada masa yang sama, SARS-Cov-2 ditentukan sebagai positif.
(2) Jika saluran FAM atau saluran VIC positif dan saluran lain negatif, ujian perlu diulang. Jika positif pada masa yang sama, ia akan dinilai sebagai positif SARS-Cov-2, jika tidak, ia akan dinilai sebagai negatif SARS-Cov-2.
Produk berkaitan
-
Kit Pengesanan Antibodi IgM/IgG COVID-19
Kit Pengesanan Antibodi IgM/IgG COVID-19 （Kaedah Imunochromatografi Emas Koloid) Manual Produk 【NAMA PRODUK】Kit Pengesanan Antibodi COVID-19 IgM/IgG （Kaedah Imunochromatography Emas Koloid) 【SPESIFIKASI PEMBUNGKUSAN/Ujian Kit1】1/Kit 1 ABSTRAK】 Koronavirus novel tergolong dalam genus β. COVID-19 ialah penyakit berjangkit pernafasan akut. Orang ramai secara amnya terdedah. Pada masa ini, pesakit yang dijangkiti novel coronavirus adalah sumber utama...
-
Kit Pengekstrakan atau Pemurnian Asid Nukleik
Pengekstrakan Asid Nukleik Atau Kit Pemurnian atau disimpan pada -20℃. Sampel hendaklah diangkut menggunakan keriting 0℃. Pengenalan Kit Pengekstrakan Atau Pemurnian Asid Nukleik (Kaedah Manik Magnetik) direka untuk penulenan automatik RNA dan DNA daripada cecair badan (seperti swab, plasma, serum) menggunakan instrumen pengekstrakan asid nukleik automatik. Teknologi zarah magnet menyediakan DNA/RNA berkualiti tinggi yang sesuai untuk ...
-
Kit Ujian Antigen SARS-CoV-2 （Immunochromatogr...
Kit Ujian Antigen SARS-CoV-2 （Kaedah Imunochromatography) Manual Produk 【NAMA PRODUK】Kit Ujian Antigen SARS-CoV-2 （Kaedah Imunochromatography) 【SPESIFIKASI PEMBUNGKUSAN】 1 Ujian/Kit 【ABSTRAK】 genus novel coronavirus. COVID-19 ialah penyakit berjangkit pernafasan akut. Orang ramai secara amnya terdedah. Pada masa ini, pesakit yang dijangkiti novel coronavirus adalah...
-
Kit Ujian Antigen SARS-CoV-2
Kit Ujian Antigen SARS-CoV-2 （Kaedah Imunochromatography) Manual Produk 【NAMA PRODUK】Kit Ujian Antigen SARS-CoV-2 （Kaedah Imunochromatography) 【SPESIFIKASI PEMBUNGKUSAN】 1 Ujian/Kit ,25Ujian/Kit STRit【AB00, 10K coronavirus novel tergolong dalam genus β. COVID-19 ialah penyakit berjangkit pernafasan akut. Orang ramai secara amnya terdedah. Pada masa ini, pesakit yang dijangkiti novel coronavirus adalah punca utama jangkitan; orang yang dijangkiti tanpa gejala...